Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中不断扩展

从第一次浮现胰岛自身蛋白质到浮现1标准型癌症药理学呕吐的实质性不下在幼儿末期就有较好的揭示，多个胰岛自身蛋白质不同之处性的幼儿里面有70%在血清转换后10年内患病癌症，而随访15年的幼儿这一百分比提高到84%。比起来说，占药理学1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的中风机制还没有人给与充分的研究工作。

越来越多的人开始用到分期系统来表述1标准型癌症的实质性：个形体在浮现多种胰岛自身蛋白质时转回第1过渡阶段，浮现血糖持续性时转回第2过渡阶段，浮现呕吐时转回第3过渡阶段。一些多发胰岛自身蛋白质不同之处性的个形体，在1期和2期，实质性较迟，并发展为中风的1标准型癌症。我们此前揭示了一四组在首次侦测到多种胰岛自身蛋白质采样后至寡10年无癌症的极迟实质性者，这四组高血压总人数寡，但不同之处并不恰当。随后，我们见到胰岛自身蛋白质酪氨酸CD8+T巨噬细胞底物在实质性缓迟的高血压里面原则上不实际上，但在同类型中风和近十年实际上的癌症高血压里面很容易侦测到。这可能表明，与实质性高血压比起来说，这些高血压免疫性底物的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数目正常，但癌症高血压实际上一些动态瑕疵，其里面都有对IL-2的底物能力提高。此外，癌症高血压里面的波动CD4+T巨噬细胞可能对调节更具抵抗性，展现出为波动T巨噬细胞的消除减弱，自然产生的Treg和形体外产生的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T巨噬细胞里面IL-2底物减弱。本研究工作的目的是揭示了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群极缓迟实质性者里面的不同之处，他们的半数组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的高血压亲属里面检查1标准型癌症的危险状况。我们此前揭示了近十年缓迟实质性者的不同之处，他们始终保持多重胰岛自身蛋白质不同之处性超过10年，但没有人浮现癌症的药理学呕吐，迟性或非来受虐免疫性。随后，10名继续始终保持无癌症并不想提供大量血液采样的缓迟实质性者纳入T和B巨噬细胞动态比对。在目前的研究工作里面，8名迟实质性者(SP四组)，里面位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的胰岛自身蛋白质不同之处性。所有的参与者都位处1标准型癌症实质性的1期，尽管一些人随后失去了胰岛自身蛋白质对某些蛋白质的不同之处性底物，然而，一名高血压从未位处2期至寡6年，但没有人浮现药理学呕吐，一名高血压被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验四楼采样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据比对里面对该供形体来进行了单独评估。转化外周血单个核能巨噬细胞(PBMCs)，有别于多实例流式巨噬细胞心法和T巨噬细胞消除飞行测试评估供形体里面Treg的频不下、表标准型和动态。用到FlowSOM和CITRUS(聚类检验、总括和紧接)来进行无都由聚类比对，评估Treg表标准型。

结果：与健康供形体比起来说，来自迟实质性形体的思绪CD4+T巨噬细胞的都由聚类推断，作用于的思绪CD4+ Treg频不下提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关亚基(GITR)说明提高有关。一名HbA1c增大的高血压与实质性缓迟者和也就是说的结果表明比起来说，Treg谱有所并不相同。动态比对表明，与健康供形体比起来说，来自缓迟实质性形体的Treg诱导的CD4+波动T巨噬细胞消除明显受损。展现出为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134说明的消除提高。

上图1 深入的表标准型比对推断，CD4+Treg亚标准型在迟实质性链表里面提高。由FlowSOM聚合的Treg四楼，聚集在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物说明检验出10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个并不相同Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个节点象征性一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在节点四组附近上色。每个节点里面的饼上图说明单个上面的说明档次。(b)每个元聚类的热上图，以推断整形体上面说明。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)聚合上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起同位素为每个metacluster箱内两条路线上图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP四组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。粉红色橘色象征性慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用到CITRUS的预测模标准型声称，Treg频不下的提高是实质性缓迟的标志。分级门控(a - f)和果树比对(g-k)比较SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的象征性性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR说明来进行转化，演示FlowSOM群形体。(b) HD(小点)和SP(杂色)四组以及供形体SP 606(粉红色)里面CD25+ cd127的频不下统计上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱内两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3说明强度后处理，左下角突出的簇被识别为SP和HD链表相互间的并不相同。(j)箱内两条路线上图推断了在SP(杂色)和HD(灰点)四组里面，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比起同位素(百分比)。(k)直方上图推断每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上面比起说明与故事情节说明(深蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇里面上面的说明有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩验

上图3 与健康献血者比起来说，实质性缓迟者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个说明上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的说明热上图(sp606不都有在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR说明联接，推断直方上图(c)和统计上图(d)。Wilcoxon配对记号秩和验，p< 0.07(粉红色)所有供形体都有，p< 0.05(深蓝色)供形体SP 606和也就是说的HD不都有在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR说明，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)联接，推断直方上图(e)和统计上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩验

上图4 来自缓迟实质性的CD4+ treg巨噬细胞高度集中波动CD4+T巨噬细胞的能力提高。SP四组用深蓝色的两条路线和橘色说明，HD四组用黑色的两条路线和橘色说明，粉红色的两条路线/橘色说明供形体sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，培植3紧接著来进行流式巨噬细胞心法侦测。(a-d)与CD4+接收者者比起应的treg培植(诱导)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培植。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。用到不同之处性相符合(作用于的响应巨噬细胞分别为treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 波动CD4+T巨噬细胞对缓迟实质性的T巨噬细胞诱导的消除更敏感。SP四组用深蓝色的两条路线和橘色说明，HD四组用黑色的两条路线和橘色说明，粉红色的两条路线/橘色说明供形体sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，培植3紧接著来进行流式巨噬细胞心法(CD25反染)和巨噬细胞因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者都由培植。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE消除%-(b)。(c,d) CD25消除%-(c)和CD134消除%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植里面的说明。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得出的正确性是，来自缓迟实质性子的诱导思绪CD4+Treg在GITR说明里面给与了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1标准型癌症风险个形体里面的表型的重要性。

中文翻译出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28